精準醫(yī)療將腫瘤基因分型與靶向治療相結(jié)合用于肺癌的治療，改變了肺癌臨床治療的格局。EGFR、ALK、ROS1（EAR）是肺癌靶向治療的重要靶點，EAR基因同步檢測已被歐洲ESMO、中國肺癌診療專家共識等推薦，是讓患者從肺癌精準醫(yī)療中獲益的有效策略（EAR同步檢測的臨床意義詳見http://news.bioon.com/article/6679926.html）。目前應用于腫瘤基因分型檢測的技術(shù)眾多，包括實時熒光定量PCR（qPCR）、測序、數(shù)字PCR（ddPCR）、基因芯片、熒光原位雜交（FISH）等。而可用于EAR基因同步檢測的高通量檢測技術(shù)主要有測序、基因芯片、qPCR等。
Sanger測序作為早期的測序技術(shù)，依然是基因檢測的金標準，但是由于其檢測靈敏度低，操作復雜，成本高等問題，限制了其臨床應用。NGS技術(shù)的出現(xiàn)使測序成本大大降低，檢測靈敏度和通量有所提高，且“精準醫(yī)療”計劃的提出也使得NGS技術(shù)受到行業(yè)各界的追捧，已成為目前醫(yī)學領(lǐng)域中較為火熱的研究技術(shù)。在高通量測序方面，CFDA先后批準了幾款應用于NIPT的測序儀和檢測試劑，但是在腫瘤檢測方面，由于NGS應用于腫瘤細胞突變檢測的標準化和質(zhì)量控制尚未形成共識，目前還沒有高通量測序儀和高通量檢測試劑盒獲批，僅允許臨床試點單位以自制試劑（LDTs）的形式開展檢測服務，可見，國家對于其臨床的廣泛應用仍持保留態(tài)度。此外，高通量測序在成本效益上適合于開發(fā)同時檢測多目標基因panel（幾十上百個基因或靶點）產(chǎn)品，但因為有些位點突變率很低，很難找到足夠的病人開展臨床試驗，并且檢測結(jié)果也無法去驗證，從長遠來看，此類產(chǎn)品很難以獲批，只能以自制試劑（LDTs）的形式在臨檢實驗室使用，短期內(nèi)還難以實現(xiàn)臨床的廣泛應用。
基因芯片技術(shù)是在高通量測序技術(shù)出現(xiàn)之前被廣泛用于多基因檢測的技術(shù)。在腫瘤診斷領(lǐng)域，基因芯片技術(shù)通過對腫瘤基因表達譜分析，組成腫瘤基因診斷芯片，研究腫瘤基因的功能，既可用于腫瘤普查又能達到早期診斷和早期治療的目的。但其要成為臨床診斷和治療腫瘤普遍采用的技術(shù)仍有一些關(guān)鍵問題需要解決，如操作繁瑣、成本高和檢測時間長、易出現(xiàn)假陽性，且檢測結(jié)果往往還需要測序或定量PCR進行驗證等等。
相比之下，經(jīng)典的qPCR技術(shù)具備操作簡便、靈敏度高、特異性好、結(jié)果判讀簡單等優(yōu)勢，已成為臨床廣泛應用的檢測方法。在檢測通量上，一般認為qPCR技術(shù)受熒光染料種類限制，不適合多基因檢測。然而隨著多重熒光PCR技術(shù)的發(fā)展、一些創(chuàng)新性的探針和引物設計技術(shù)的出現(xiàn)，qPCR平臺已經(jīng)克服了通量瓶頸。在腫瘤靶向用藥檢測領(lǐng)域，已有創(chuàng)新性的多種基因聯(lián)合檢測的產(chǎn)品上市，代表性產(chǎn)品有：人類KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因突變聯(lián)合檢測試劑盒、人類ALK基因融合和ROS1基因融合聯(lián)合檢測試劑盒等。因此qPCR法是目前較易于臨床推廣的可用于EAR同步檢測的檢驗方法。
目前，qPCR平臺技術(shù)又包括ARMS（艾德、凱杰）、HRM（為真）、Taqman（羅氏）等技術(shù)，主要差別為特異性、靈敏度，其中臨床廣泛應用的依然是ARMS技術(shù)。根據(jù)2015年EMQN室間質(zhì)評調(diào)查數(shù)據(jù)（表1）可知，以ARMS技術(shù)開發(fā)的AmoyDx和Qiagen的商業(yè)化試劑盒產(chǎn)品在臨床上的使用率很高，占比高達43.81%。
表1 2015 EMQN室間質(zhì)評活動中使用方法比率
在肺癌精準醫(yī)療的用藥檢測上，CFDA批準的肺癌臨床用藥檢驗產(chǎn)品有數(shù)十個（表2）。從技術(shù)上來看，qPCR技術(shù)依然是臨床應用的主流技術(shù)，該技術(shù)下獲批的肺癌臨床用藥檢測產(chǎn)品很多，覆蓋了肺癌目前已獲批上市的靶向藥物的所有靶點，并且已有基于ARMS技術(shù)的EAR三基因聯(lián)合檢測產(chǎn)品上市。
表2 CFDA獲批的的肺癌EGFR、ALK、ROS1基因突變檢測產(chǎn)品
從臨床實際應用角度出發(fā)，目前已發(fā)現(xiàn)的肺癌相關(guān)驅(qū)動性基因有十多個，并還不斷的有新的靶點被發(fā)現(xiàn)出來。各大醫(yī)藥企業(yè)紛紛布局臨床研究，針對這些靶點開發(fā)新的靶向藥物。相信隨著肺癌新靶點的發(fā)現(xiàn)和新靶向藥物的研發(fā)，高通量檢測更多靶點的技術(shù)將更有利于肺癌精準醫(yī)療決策的制定。我們期待高通量測序技術(shù)能解決臨床應用相關(guān)問題、監(jiān)管機構(gòu)能通過政策改革，推動LDTs的臨床應用規(guī)范化和標準化建設。同時，也期待有越來越多機構(gòu)通過技術(shù)創(chuàng)新，在適合于臨床應用的技術(shù)平臺上，如qPCR技術(shù)平臺，開發(fā)出同時檢測更多靶點的檢測產(chǎn)品，協(xié)助臨床制定優(yōu)異治療方案，為患者節(jié)省寶貴時間。
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